Fast surveillance response reveals the introduction of a new yellow fever virus sub-lineage in 2021, in Minas Gerais, Brazil

BACKGROUND In Brazil, the yellow fever virus (YFV) is maintained in a sylvatic cycle involving wild mosquitoes and non-human primates (NHPs). The virus is endemic to the Amazon region; however, waves of epidemic expansion reaching other Brazilian states sporadically occur, eventually causing spillovers to humans. OBJECTIVES To report a surveillance effort that led to the first confirmation of YFV in NHPs in the state of Minas Gerais (MG), Southeast region, in 2021. METHODS A surveillance network was created, encompassing the technology of smartphone applications and coordinated actions of several research institutions and health services to monitor and investigate NHP epizootics. FINDINGS When alerts were spread through the network, samples from NHPs were collected and YFV infection confirmed by reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and genome sequencing at an interval of only 10 days. Near-complete genomes were generated using the Nanopore MinION sequencer. Phylogenetic analysis indicated that viral genomes were related to the South American genotype I, clustering with a genome detected in the Amazon region (state of Pará) in 2017, named YFVPA/MG sub-lineage. Fast YFV confirmation potentialised vaccination campaigns. MAIN CONCLUSIONS A new YFV introduction was detected in MG 6 years after the beginning of the major outbreak reported in the state (2015-2018). The YFV strain was not related to the sub-lineages previously reported in MG. No human cases have been reported, suggesting the importance of coordinated surveillance of NHPs using available technologies and supporting laboratories to ensure a quick response and implementation of contingency measures to avoid YFV spillover to humans.

The constitutive expression of the V gene of Parainfluenza virus 5 affects the growth properties of bovine herpesvirus 5

This study aimed to analyze the effect of the expression of Parainfluenza virus 5 (PIV5) V protein in bovine cells on the replication of Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5). Growth properties of BoHV-5 were evaluated in parental and PIV5 transfected cells. In one-step growth experiments, the BoHV-5 reached higher titers at earlier time points in the transfected cells when compared to the parental cells. The mean plaque size produced by the BoHV-5 in transfected cells was larger than the parental cells. This indicated that the expression of the PIV5 V gene facilitated the release and cell-to-cell spread of BoHV-5 in bovine cells.

Emerging animal viruses: real threats or simple bystanders? / Vírus emergentes de animais: verdadeiras ameaças ou meros espectadores?

The list of animal viruses has been frequently added of new members raising permanent concerns to virologists and veterinarians. The pathogenic potential and association with disease have been clearly demonstrated for some, but not for all of these emerging viruses. This review describes recent discoveries of animal viruses and their potential relevance for veterinary practice. Dogs were considered refractory to influenza viruses until 2004, when an influenza A virus subtype H3N8 was transmitted from horses and produced severe respiratory disease in racing greyhounds in Florida/USA. The novel virus, named canine influenza virus (CIV), is considered now a separate virus lineage and has spread among urban canine population in the USA. A new pestivirus (Flaviviridae), tentatively called HoBi-like pestivirus, was identified in 2004 in commercial fetal bovine serum from Brazil. Hobi-like viruses are genetically and antigenically related to bovine viral diarrhea virus (BVDV) and induce similar clinical manifestations. These novel viruses seem to be widespread in Brazilian herds and have also been detected in Southeast Asia and Europe. In 2011, a novel mosquito-borne orthobunyavirus, named Schmallenberg virus (SBV), was associated with fever, drop in milk production, abortion and newborn malformation in cattle and sheep in Germany. Subsequently, the virus disseminated over several European countries and currently represents a real treat for animal health. [...] Finally, the long time and intensive search for animal relatives of human hepatitis C virus (HCV) has led to the identification of novel hepaciviruses in dogs (canine hepacivirus [CHV]), horses (non-primate hepaciviruses [NPHV] or Theiler's disease associated virus [TDAV]) and rodents. For these, a clear and definitive association with disease is still lacking and only time and investigation will tell whether they are real disease agents or simple spectators.

O número de vírus animais cresce continuamente, causando preocupação permanente a virologistas e veterinários. O potencial patogênico e associação com doença tem sido claramente demonstrado para alguns - mas não para todos - vírus emergentes. Esse artigo apresenta uma breve revisão das recentes descobertas de vírus animais e a sua potencial relevância para saúde animal. Cães eram considerados refratários aos vírus da influenza até 2004, quando um vírus influenza A subtipo H3N8 foi transmitido de equinos e causou doença respiratória severa em cães galgos na Flórida/EUA. O novo vírus, denominado vírus da influenza canina (CIV), agora considerado uma linhagem distinta do vírus da influenza equina, disseminou-se na população canina urbana dos EUA. Um novo Pestivirus (Flaviviridae) - provisoriamente denominado pestivírus Hobi-like - foi identificado em 2004 em soro fetal bovino importado do Brasil. Os vírus Hobi-like são genética e antigenicamente relacionados com o vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e induzem manifestações clínicas semelhantes. A sua origem e distribuição são desconhecidas, mas estão aparentemente disseminados no rebanho brasileiro e já foram identificados no sudeste asiático e na Europa. Em 2011, um novo buniavírus transmitido por mosquitos, denominado vírus Schmallemberg (SBV), foi associado com febre, redução da produção de leite, abortos e malformações fetais em bovinos e ovinos da Alemanha. [...] Finalmente, a longa e intensiva busca por vírus animais relacionados ao vírus da hepatite C humana (HCV) tem levado a identificação de "novos" pestivírus em cães (canine hepacivirus [CHV]), equinos (hepacivirus de não-primatas [NPHV] ou vírus associado à doença de Theiler [TDAV]) e em roedores. Para estes, uma associação clara e definitiva com doença ainda não foi demonstrada e apenas tempo e investigação irão dizer se são patógenos reais ou apenas espectadores.

Detection of vanC 1 gene transcription in vancomycin-susceptible Enterococcus faecalis

Here we report the presence and expression levels of the vanC 1 and vanC 2/3 genes in vancomycin-susceptible strains of Enterococcus faecalis. The vanC 1 and vanC 2/3 genes were located in the plasmid DNA and on the chromosome, respectively. Specific mRNA of the vanC 1 gene was detected in one of these strains. Additionally, analysis of the vanC gene sequences showed that these genes are related to the vanC genes of Enterococcus gallinarum and Enterococcus casseliflavus. The presence of vanC genes is useful for the identification of E. gallinarum and E. casseliflavus. Moreover, this is the first report of vanC mRNA in E. faecalis.

Prevalence of enterotoxin-encoding genes and antimicrobial resistance in coagulase-negative and coagulase-positive Staphylococcus isolates from black pudding / Prevalência de genes codificadores de enterotoxinas e resistência antimicrobiana em estafilococos coagulase-negativo e coagulase-positivo isolados de morcilhas no sul do Brasil

INTRODUCTION: Staphylococcal species are pathogens that are responsible for outbreaks of foodborne diseases. The aim of this study was to investigate the prevalence of enterotoxin-genes and the antimicrobial resistance profile in staphylococcus coagulase-negative (CoNS) and coagulasepositive (CoPS) isolates from black pudding in southern Brazil. METHODS: Two hundred typical and atypical colonies from Baird-Parker agar were inoculated on mannitol salt agar. Eighty-two mannitol-positive staphylococci were submitted to conventional biochemical tests and antimicrobial susceptibility profiling. The presence of coagulase (coa) and enterotoxin (se) genes was investigated by polymerase chain reaction. RESULTS: The isolates were divided into 2 groups: 75.6% (62/82) were CoNS and 24.4% (20/82) were CoPS. The biochemical tests identified 9 species, of which Staphylococcus saprophyticus (37.8%) and Staphylococcus carnosus (15.9%) were the most prevalent. Antimicrobial susceptibility tests showed resistance phenotypes to antibiotics widely administered in humans, such as gentamicin, tetracycline, chloramphenicol, and erythromycin. The coa gene was detected in 19.5% (16/82) of the strains and 4 polymorphic DNA fragments were observed. Five CoNS isolates carrying the coa gene were submitted for 16S rRNA sequencing and 3 showed similarity with CoNS. Forty strains were positive for at least 1 enterotoxin-encoding gene, the genes most frequently detected were sea (28.6%) and seb (27.5%). CONCLUSIONS: The presence of antimicrobial resistant and enterotoxin-encoding genes in staphylococci isolates from black pudding indicated that this fermented food may represent a potential health risk, since staphylococci present in food could cause foodborne diseases or be a possible route for the transfer of antimicrobial resistance to humans.

INTRODUÇÃO: Estafilococos são patógenos responsáveis por surtos de doenças transmitidas por alimentos. O estudo investigou a prevalência de genes de enterotoxinas e o perfil de resistência aos antimicrobianos em estafilococos coagulase-negativo (CoNS) e estafilococos coagulase-positivo (CoPS) isolados de morcilhas no sul do Brasil. MÉTODOS: Duzentas colônias típicas e atípicas do ágar Baird-Parker foram inoculadas em ágar sal-manitol. Oitenta e dois estafilococos manitol-positivos foram submetidos a testes bioquímicos e perfil de susceptibilidade antimicrobiana. A presença dos genes da coagulase (coa) e enterotoxinas (se) foi investigada por reação em cadeia da polimerase (PCR). RESULTADOS: Os isolados foram divididos em dois grupos: 75,6% (62/82) CoNS e 24,4% (20/82) CoPS. Através dos testes bioquímicos, 9 espécies foram determinadas, Staphylococcus saprophyticus (37,8%) e Staphylococcus carnosus (15,9%) foram as mais prevalentes. Testes de susceptibilidade demostraram fenótipos de resistência aos antibióticos administrados em humanos, como gentamicina, tetraciclina, cloranfenicol e eritromicina. O gene coa foi detectado em 19,5% (16/82) das cepas e quatro fragmentos de DNA polimórficos foram observados. Cinco CoNS contendo o gene coa foram submetidos ao sequenciamento do 16S rRNA e três mostraram similaridade com CoNS. Quarenta amostras foram positivas para pelo menos um gene se, os mais frequentes foram sea (28,6%) e seb (27,5%). CONCLUSÕES: A presença de resistência aos antimicrobianos e de genes se nos isolados de morcilha indicou que este alimento pode representar um risco potencial à saúde, já que a presença nos alimentos pode causar doenças de origem alimentar ou ser uma possível rota de transferência de estafilococos resistentes aos humanos.

Analysis of isotype-specific antibody responses to bovine herpesviruses 1.1 and 1.2a allows to estimate the stage of infection

Specific IgM, IgA, IgG1, IgG2, as well as neutralizing antibody responses were evaluated in sera of calves experimentally infected with two isolates of bovine herpesvirus type 1 (BoHV1) of distinct subtypes (subtype 1, BoHV1.1; subtype 2a, BoHV-1.2a). No significant differences were observed in the antibody responses induced by each BoHV-1 subtype. The antibody responses following primary acute infection were characterized by an increase in specific IgM and IgA levels between days 2 and 14 post inoculation (pi). IgG1 was detected from days 11 to 30 pi. IgG2 was detected on the sample taken on day 30 pi. Reactivation of infection following dexamethasone administration induced a significant rise in IgA levels, whereas IgG1 and IgG2 levels, which were at high levels from the beginning of the reactivation process, showed a slight alteration after corticosteroid treatment. These results suggest that it is possible to estimate the dynamics of BoHV-1 infections with basis on the analysis of class- and subclass-specific antibody responses. Such information may be particularly useful for the study of the kinetics of the infection in a herd and to aid in the adoption of appropriate control measures..

Genital immunization of heifers with a glycoprotein Edeleted, recombinant bovine herpesvirus 1 strain confers protection upon challenge with a virulent isolate / Imunização genital de bezerras com uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E confere proteção frente a desafio com um isolado virulento

Venereal infection of seronegative heifers and cows with bovine herpesvirus type 1.2 (BoHV-1.2) frequently results in vulvovaginitis and transient infertility. Parenteral immunization with inactivated or modified live BoHV-1 vaccines often fails in conferring protection upon genital challenge. We herein report an evaluation of the immune response and protection conferred by genital vaccination of heifers with a glycoprotein E-deleted recombinant virus (SV265gE-). A group of six seronegative heifers was vaccinated with SV265gE- (0,2mL containing 10(6.9)TCID50) in the vulva submucosa (group IV); four heifers were vaccinated intramuscularly (group IM, 1mL containing 10(7.6)TCID50) and four heifers remained as non-vaccinated controls. Heifers vaccinated IV developed mild, transient local edema and hyperemia and shed low amounts of virus for a few days after vaccination, yet a sentinel heifer maintained in close contact did not seroconvert. Attempts to reactivate the vaccine virus in two IV vaccinated heifers by intravenous administration of dexamethasone (0.5mg/kg) at day 70 pv failed since no virus shedding, recrudescence of genital signs or seroconversion were observed. At day 70 pv, all vaccinated and control heifers were challenged by genital inoculation of a highly virulent BoHV-1.2 isolate (SV56/90, 10(7.1)TCID50/animal). After challenge, virus shedding was detected in genital secretions of control animals for 8.2 days (8-9); in the IM group for 6.2 days (4-8 days) and during 5.2 days (5-6 days) in the IV group. Control non-vaccinated heifers developed moderate (2/4) or severe (2/4) vulvovaginitis lasting 9 to 13 days (x: 10.7 days). The disease was characterized by vulvar edema, vulvo-vestibular congestion, vesicles progressing to coalescence and erosions, fibrino-necrotic plaques and fibrinopurulent exudate. IM vaccinated heifers developed mild (1/3) or moderate (3/4) genital lesions, lasting 10 to 12 days (x: 10.7 days); and IV vaccinated ...

A infecção genital de novilhas ou vacas soronegativas pelo herpesvírus bovino tipo 1.2 (BoHV-1.2) pode resultar em vulvovaginite e infertilidade temporária. As vacinas atenuadas ou inativadas administradas pela via parenteral freqüentemente conferem proteção incompleta frente a desafio pela via genital. Este estudo relata uma avaliação da resposta imunológica e proteção conferida pela vacinação genital de bezerras soronegativas com uma cepa recombinante do BoHV-1 defectiva na glicoproteína E (SV265gE-). Um grupo de seis bezerras foi vacinado com a cepa SV265gE(0,2mL contendo 10(6,9)TCID50) na submucosa da vulva (grupo IV); quatro bezerras foram vacinadas pela via intramuscular (IM; dose 10(7,6)TCID50) e quatro bezerras permaneceram como controles não-vacinadas. As bezerras vacinadas pela via IV apresentaram edema e hiperemia leve e transitório na vulva e excretaram vírus em títulos baixos por alguns dias após a vacinação, porém uma bezerra soronegativa mantida em contato não soroconverteu. Administração de dexametasona pela via intravenosa no dia 70pv (0,5mg/kg) em duas bezerras vacinadas pela via IV não resultou em excreção viral, recrudescência clínica ou soroconversão. No dia 70pv, as bezerras vacinadas e as controle foram desafiadas pela inoculação genital da cepa de BoHV-1.2 altamente virulenta SV56/90 (10(7.1)TCID50/animal). Após o desafio, excreção viral nas secreções genitais das bezerras controle foi detectada por 8,2 dias (8-9); no grupo IM durante 6,2 dias (4-8 dias) e durante 5,2 dias (5-6) nas bezerras do grupo IN. As bezerras do grupo controle desenvolveram vulvovaginite moderada (2/4) a severa (2/4) que duraram entre 9 e 13 dias (x: 10,7 dias). A doença se caracterizou por edema vulvar, congestão vulvo-vestibular, formação de vesículas/pústulas que coalesceram, erosões, placas fibrino-necróticas e exsudato fibrino-purulento. As bezerras do grupo IM desenvolveram lesões genitais leves (1/3) a moderadas (3/4), com duração ...

Experimental infection of rabbits with a recombinant bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) gI, gE and US9-negative / Infecção experimental de coelhos com um recombinante do herpesvírus bovino tipo 5 defectivo na gI, gE e US9

Bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5) is a major cause of viral meningoencephalitis in cattle. The expression of different viral proteins has been associated with BoHV-5 neuropathogenesis. Among these, gI, gE and US9 have been considered essential for the production of neurological disease in infected animals. To evaluate the role of gI, gE and US9 in neurovirulence, a recombinant from which the respective genes were deleted (BoHV-5 gI-/gE-/US9-) was constructed and inoculated in rabbits of two age groups (four and eight weeks-old). When the recombinant virus was inoculated through the paranasal sinuses of four weeks-old rabbits, neurological disease was observed and death was the outcome in 4 out of 13 (30.7 percent) animals, whereas clinical signs and death were observed in 11/13 (84.6 percent) of rabbits infected with the parental virus. In eight weeks-old rabbits, the BoHV-5 gI-/gE-/US9- did not induce clinically apparent disease and could not be reactivated after dexamethasone administration, whereas wild type BoHV-5 caused disease in 55.5 percent of the animals and was reactivated. These findings reveal that the simultaneous deletion of gI, gE and US9 genes did reduce but did not completely abolish the neurovirulence of BoHV-5 in rabbits, indicating that other viral genes may also play a role in the induction of neurological disease.

O herpesvírus bovino tipo 5 é uma das principais causas de meningoencefalite viral em bovinos. A expressão de diferentes proteínas virais tem sido associada à neuropatogenia do BoHV-5. Entre estas, a gI, gE e US9 têm sido consideradas essenciais para a indução de sinais neurológicos nos animais infectados. Para avaliar o papel das proteínas gI, gE e US9 na neurovirulência, construiu-se um recombinante no qual os genes que codificam estas proteínas foram deletados, denominado BoHV-5 gI-/gE-/US9-. Este vírus foi inoculado em coelhos de idades diferentes (quatro e oito semanas de idade). Quando o vírus recombinante foi inoculado nos seios paranasais de coelhos de quatro semanas de idade, doença neurológica e morte foram observadas em 4 dos 13 (30,7 por cento) animais, enquanto que sinais clínicos e morte foram observados em 11/13 (84,6 por cento) dos coelhos infectados com o vírus parental. Em coelhos de oito semanas de idade, o BoHV-5 gI-/gE-/US9- não induziu sinais clínicos aparentes e, após tentativa de reativação viral por tratamento com dexametasona, o vírus não foi re-excretado. Por outro lado, o vírus selvagem causou doença clínica em 55,5 por cento dos coelhos e foi re-excretado após tratamento com dexametasona. Estes achados revelam que a deleção simultânea dos genes gI, gE e US9 reduziu mas não aboliu completamente a neurovirulência do BoHV-5 em coelhos, indicando que outros genes virais possam ter papel na indução da doença neurológica.

Absence motivated by illness: a non-concurrent prospective study of physical education teachers in the municipal education system of the city of Campinas, São Paulo, Brazil / Ausência motivada por doença: estudo prospectivo não concorrente de professores de Educação Física do sistema educacional da Prefeitura de Campinas, SP - Brasil

The object of this investigation was to identify and analize aspects of the health status related to absenteism in physical education teachers in the municipal education system of the city of Campinas, Brazil, as related to the medical leave program. The non-concurrent prospective study was accomplished by means of a comparison with teachers who work only in the classroom, refering to a three year period. In the variables of greatest interest, the Pearson non-parametric chi-square (X2) statistical test was adopted. Calculations of relative risk and level of confidence were made using the "Epi-info" computer program. Significant differences were observed in the following diagnostic groups favoring the not exposed group: i) Supplementary Classification of factors that exercise influence over the health status and access to health services and ii) Digestive system illness while the physical education teachers showed a significant difference in: i) diseases of the musculoskeletal and connective tissue system and ii) Injuries and poisoing. Possible explications for some of the adverse effects as well as the protective ones that were observed include physical activity as a way of life along with being a physical education teacher and on the other side, peculiar behavior of epidemiological descriptive characteristics, like sex and age, within the socio-economic context of the country.

Diagnóstico de raiva no Rio Grande do Sul, Brasil, de 1985 a 2007 / Rabies diagnosis in the state of Rio Grande do Sul, Brazil, from 1985 to 2007

São apresentados os resultados de 23 anos de diagnósticos de raiva realizados no Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, no Estado do Rio Grande do Sul, Brasil. Entre os anos de 1985 e 2007, um total de 23.460 amostras foram diagnosticadas no laboratório, compreendendo cerca de 95 por cento do número total de amostras submetidas ao diagnóstico laboratorial de raiva no Estado. A metodologia utilizada seguiu técnicas padrões como a imunofluorescência direta (IFD) e inoculação em camundongos (IC). Não ocorreram casos de raiva humana no período. O vírus rábico (VR) foi detectado em 739 (3,1 por cento) amostras, sendo 656 (88,7 por cento) de origem bovina. O vírus foi também identificado em 23 caninos (3,1 por cento), 21 eqüinos (2,9 por cento), 29 quirópteros (4,0 por cento), 4 felinos (0,5 por cento), 3 ovinos (0,4 por cento), 2 suínos (0,27 por cento) e em um animal selvagem de espécie indeterminada (0,13 por cento). O último caso de raiva em cães associado com variantes do vírus endêmicas nessa espécie foi diagnosticado em 1988. Dois episódios de contaminação incidental registrados em um felino em 2001 e em um canino em 2007, associados com variantes do vírus prevalentes em morcegos. Em relação à raiva bovina, os dados aqui apresentados revelam uma marcante diminuição no número de casos de raiva nessa espécie, em comparação com registros prévios. Por outro lado, um aumento no número de casos de raiva em morcegos hematófagos e não hematófagos vem sendo observado; no entanto, não é possível associar este aumento com modificações nas relações vírus/hospedeiro, pois o número de morcegos submetidos para diagnóstico tem igualmente aumentado. Isto provavelmente reflete o aumento do conhecimento sobre o papel de morcegos no ciclo de transmissão, e não necessariamente alterações no vírus e/ou nos hospedeiros.(AU)

The results of 23 years of rabies diagnosis carried out at the Veterinary Research Institute Desidério Finamor, in the state of Rio Grande do Sul, RS, Brazil, are reported. From 1985 to 2007, a total of 23.460 specimens were examined, corresponding to 95 percent of the total number of samples submitted to rabies laboratory diagnosis notified within the state. Diagnostic methods included standard techniques such as the fluorescent antibody test (FAT) and mouse inoculation test (MIT). No cases of human rabies occurred in the period. Rabies virus (RV) was detected in 739 specimens (3.1 percent), from which 656 (88.7 percent) were from cattle. The virus was also identified in specimens from 23 dogs (3.1 percent), 21 horses (2.9 percent), 29 bats (4.0 percent), 4 cats (0.5 percent), 3 sheep (0.4 percent), 2 pigs (0.27 percent) and a wild animal of undetermined species (0.13 percent). The last case of rabies associated with a canine variant was diagnosed in 1988. Two cases of rabies associated with bat variant viruses were reported, in a domestic cat (2001) and in a dog (2007). In cattle, a marked tendency to a decrease in the number of cases was detected in the examined period. In contrast, an increase in the number of cases in haematophagous as well as in non haematophagous bats is noticed. However, as the number of bat specimens submitted for diagnosis has increased, this finding most likely reflects a higher degree of awareness on the possible role for bats in the rabies transmission cycle, rather than any particular changes on the virus or its hosts.(AU)

Construction and characterization of a bovine herpesvirus 5 mutant with a deletion of the gI, gE and US9 genes

Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is a important cause of viral encephalitis in cattle in South America. Within the framework of developing a differential vaccine against BoHV-5, a deletion mutant was constructed based on a Brazilian BoHV-5 isolate. The target of the deletions were genes that code proteins implicated in the neurovirulence of BoHV-5, the glycoprotein I (gI), glycoprotein E (gE) and membrane protein US9. To construct the deletion mutant of BoHV-5, the flanking regions of all three genes were cloned in a prokaryotic plasmid. This deletion fragment was co-transfected with the viral DNA into bovine cells. Identification of deletion mutants was performed by immunostaining with an anti-gE monoclonal antibody. One of the gE negative viral populations found was purified, amplified and further examined by restriction endonuclesase analysis of its genomic DNA. The plaque sizes and penetration kinetics of the deletion mutant and wild type viruses were compared. The plaque sizes of the deletion mutant were significantly smaller than those of the parental strain (p <= 0.05), but no statistical differences were observed in penetration kinetics. The results indicate that the gI/gE/US9 deletion mutant of BoHV-5 may have a reduced virulence in the host and is still viable enough to be a good candidate for the development of a BoHV-5 vaccine.

O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é uma causa importante de encefalite viral em bovinos na América do Sul. Buscando o desenvolvimento de uma vacina diferencial contra o BoHV-5, um mutante deletado foi construído com base em um isolado brasileiro deste vírus. O alvo das deleções foram genes que codificam proteínas implicadas na neurovirulência do BoHV-5, a glicoproteína I (gI), a glicoproteína E (gE) e a proteína de membrana US9. Para construir o mutante deletado de BoHV-5, as regiões flanqueadoras dos três genes foram clonadas em um plasmídeo procarioto. Este fragmento de deleção foi co-transfectado com o DNA viral em células de bovinos. A identificação dos mutantes deletados foi feita por meio da técnica de imunoperoxidase com um anticorpo monoclonal anti-gE. Uma das populacões virais gE negativas encontradas foi purificada, amplificada e seu genoma foi examinado por análise de restrição enzimática. Os tamanhos de placas virais e taxas de penetração do vírus mutante foram determinados e comparados com os do vírus selvagem. As placas virais do vírus mutante deletado foram significativamente menores do que as do vírus selvagem (p <= 0,05), mas não foram encontradas diferenças significativas quando comparadas as taxas de penetração dos dois vírus. Estes resultados indicam que o vírus mutante deletado gI/gE/US9 de BoHV-5 pode apresentar virulência reduzida e é viável o suficiente para ser um bom candidato para o desenvolvimento de uma vacina contra o BoHV-5.

Anticorpos neutralizantes contra os vírus da cinomose e da parainfluenza em cães de canis dos municípios de Novo Hamburgo e Porto Alegre, RS, Brasil / Neutralizing antibodies to distemper and parainfluenza viruses in dogs in shelter kennels in the municipalities of Novo Hamburgo and Porto Alegre, RS, Brazil

No presente estudo, foi realizada uma pesquisa em busca de anticorpos neutralizantes contra os vírus da cinomose (CDV) e da parainfluenza (CPIV) caninos em amostras de soro de 173 cães recolhidos a canis municipais em Novo Hamburgo (n=82) e Porto Alegre (n=91), RS. A pesquisa de anticorpos neutralizantes foi realizada pela técnica de soroneutralização frente a duas amostras vacinais de CDV (Rockborn e Snyder Hill) e frente a uma amostra de CPIV (V660). Em relação ao CDV, 95,9 por cento das amostras de soros foram negativas para anticorpos neutralizantes contra a amostra Snyder Hill e 90,7 por cento soronegativas para a amostra Rockborn. Entre os soropositivos (n=20; 11,6 por cento), somente três deles apresentaram anticorpos neutralizantes frente às duas amostras de CDV testadas, indicando pouca reatividade cruzada entre as mesmas. Quanto ao CPIV, a prevalência de anticorpos neutralizantes encontrada frente à amostra V660 foi de 51,4 por cento. Esses achados indicam que a maioria dos cães examinados não teve contato prévio com o CDV, seja por infecção natural ou por imunização prévia. O CPIV, porém, parece estar amplamente difundido na população canina examinada, provavelmente por exposição natural ao vírus.

In this report a serological survey was carried out in search for antibodies to canine distemper virus (CDV) and canine parainfluenza virus (CPIV) in 173 sera from dogs withdraw in kennels of the municipalities of Novo Hamburgo (n=82) and Porto Alegre (n=91), RS, Brazil. Neutralizing antibodies were evaluated against two CDV strains used for vaccine production (Rockborn and Snyder Hill) as well as one strain of CPIV (V660). Search for anti-CDV neutralizing antibodies revealed that 95.9 percent of sera were negative for antibodies to CDV Snyder Hill and 90.7 percent were negative for antibodies to CDV Rockborn. Among the positive sera (n=20; 11.6 percent) only three of those had neutralizing antibodies to both CDV strains, indicating a low degree of cross reactivity between those. As regards CPIV, neutralizing antibodies to V660 were detected in 51.4 percent of sera. These findings suggest that the majority of the dogs from the populations examined in the present study had not previous contact with CDV, either by natural infection or by previous immunization. CPIV, on its turn, seem to be widespread within these populations, most likely by natural exposure to the virus.

Comparative pathogenicity of bovine herpesvirus 1 (BHV-1) subtypes 1 (BHV-1.1) and 2a (BHV-1.2a)

O presente estudo teve como objetivo examinar a capacidade de duas amostras de herpesvírus bovino tipo 1 (BHV-1) de diferentes subtipos (amostra EVI 123/96: BHV-1.1; amostra SV265/98: BHV-1.2a) de induzir doença respiratória em bovinos. Estas duas amostras são representativas de subtipos de BHV-1 prevalentes no Brasil. Os subtipos das amostras foram confirmados por análises com anticorpos monoclonais e com enzimas de restrição. As amostras foram inoculadas por via intranasal em sete bezerros de três meses de idade (quatro com BHV-1.1, três com BHV-1.2a), soronegativos para BHV-1, sendo outros três animais mantidos como controles não infectados. Nos dois grupos de animais inoculados, os sinais clínicos observados foram consistentes com o quadro de rinotraqueíte infecciosa bovina (IBR), incluindo febre, apatia, anorexia, descargas mucopurulentas nasais e oculares, conjuntivite, erosões e hiperemia na mucosa nasal, dispnéia, tosse, estridor traqueal e aumento dos linfonodos retrofaríngeos, submandibulares e cervicais. Não foram observadas diferenças significativas entre os escores clínicos atribuídos aos animais nos dois grupos. Igualmente, foram similares as quantidades de vírus re-isoladas dos animais infectados, à exceção de uma diferença significativa na disseminação de vírus pelas secreções nasais, a qual foi maior nos animais infectados com BHV-1.1 nos dias 1 a 3 pós-inoculação. Após reativação induzida por corticosteróides, foi observado recrudescimento dos sinais clínicos, os quais foram também similares em ambos os grupos. Em conclusão, as amostras de BHV-1 dos subtipos 1 e 2a não apresentaram diferenças significativas em sua patogenicidade sobre o trato respiratório nos animais inoculados, tanto após a infecção primária como após a reativação.

Isolamento do vírus Parainfluenza bovino tipo 3 no Rio GRande do Sul, Brasil / Isolation of bovine Parainfluenza virus type 3 in Rio Grande do Sul, Brazil

É descrito o isolamento do vírus Parainfluenza bovino tipo 3 (bPI-3) a partir de secreçöes nasais coletadas de um bovino com infecçäo respiratória. A identificaçäo do agente foi realizada através de isolamento em cultivo celular e confirmada por testes de hemaglutinaçäo, inibiçäo da hemaglutinaçäo, hemadsorçäo e imunofluorescência direta. Este é o primeiro registro do isolamento do vírus no Rio Grande do Sul.

A Brazilian glycoprotein E-negative bovine herpesvirus type 1.2a (BHV-1.2a) mutant is attenuated for cattle and induces protection against wild-type virus challenge

The authors previously reported the construction of a glycoprotein E-deleted (gE-) mutant of bovine herpesvirus type 1.2a (BHV-1.2a). This mutant, 265gE-, was designed as a vaccinal strain for differential vaccines, allowing the distinction between vaccinated and naturally infected cattle. In order to determine the safety and efficacy of this candidate vaccine virus, a group of calves was inoculated with 265gE-. The virus was detected in secretions of inoculated calves to lower titres and for a shorter period than the parental virus inoculated in control calves. Twenty one days after inoculation, the calves were challenged with the wild type parental virus. Only mild signs of infection were detected on vaccinated calves, whereas non-vaccinated controls displayed intense rhinotracheitis and shed virus for longer and to higher titres than vaccinated calves. Six months after vaccination, both vaccinated and control groups were subjected to reactivation of potentially latent virus. The mutant 265gE- could not be reactivated from vaccinated calves. The clinical signs observed, following the reactivation of the parental virus, were again much milder on vaccinated than on non-vaccinated calves. Moreover, parental virus shedding was considerably reduced on vaccinated calves at reactivation. In view of its attenuation, immunogenicity and protective effect upon challenge and reactivation with a virulent BHV-1, the mutant 265gE- was shown to be suitable for use as a BHV-1 differential vaccine virus

Neurovirulência e neuroinvasividade de herpesvírus bovinos tipos 1 e 5 em coelhos / Neurovirulence and neuroinvasiveness of bovine herpesvirus type 1 and 5 in rabbits

Com o objetivo de avaliar a capacidade dos herpesvírus bovinos tipos 1 e 5 (BHV-1 e BHV-5) de invadir e replicar no sistema nervoso central (SNC) (neuroinvasividade), bem como sua capacidade de induzir doença neurológica (neurovirulência), coelhos com 30 a 35 dias de idade foram inoculados com uma amostra do Herpesvírus da Encefalite Bovina (BHV-5; amostra EVI 88/95) ou com amostras de BHV-1 (Los Angeles ou Cooper), pelas vias intratecal (IT) e intranasal (IN). A inoculaçäo da amostra de BHV-5, tanto pela via IT como IN, induziu sinais clínicos neurológicos em 100 por cento (12/12) dos coelhos inoculados. Os exames histopatológicos revelaram um quadro de meningoencefalite näo-purulenta multifocal, caracterizada por gliose multifocal e infiltrados perivasculares. O vírus foi isolado de várias áreas do SNC desses animais. As amostras de BHV-1, quando inoculadas pela via IT, näo foram neurovirulentas. A amostra Los Angeles de BHV-1, quando administrada pela via IN, induziu sinais respiratórios severos, além de sinais neurológicos em 57 por cento (4/7) dos animais inoculados. Entretanto, o exame histopatológico destes quatro animais revelou vasculite e trombose no pulmäo e cérebro, este último apresentando focos de necrose neuronal, porém sem lesöes indicativas de encefalite. Isso sugere que os sinais neurológicos foram, provavelmente, conseqüentes a prejuízos no fluxo sangüíneo encefálico, e näo a danos neuronais provocados pela inoculaçäo desse vírus. A amostra Cooper de BHV-1, quando inoculada pela via IN, induziu apenas sinais leves de infecçäo respiratória. Estes resultados indicam que apenas a amostra de BHV-5 foi capaz de invadir e replicar no encéfalo dos coelhos quando inoculada tanto por via IN como IT, apresentando neuroinvasividade e neurovirulência. É possível que estas observaçöes tenham relaçäo com o fato de amostras de BHV-5 freqüentemente causarem encefalites, em contraposiçäo a infecçöes pelo BHV-1, onde encefalites säo raramente observadas

Relaçäo saúde/doença de professores de educaçäo física expressa em estudo na rede municipal de ensino, Campinas-SP / Health-disease relationship among physical education teachers: a study from the municipal education system, Campinas-SP

O problema que motivou a presente investigação foi a preocupação de professores de Educação Física (EF) com a saúde no decorrer do exercício profissional: objetiva-se conhecer e discutir aspectos ligados a licenças médicas de professores efetivos de EF da rede de ensino da Prefeitura Municipal de Campinas, em relação a outro grupo de docentes das disciplinas de Matemática ou de Português, tomados como termo de comparação, na busca de identificação de especificidades. O estudo consistiu em observacional do tipo prospectivo não concorrente. Em variáveis de interesse aplicou-se a estatística não-paramétrica quiquadrado de Pearson (c2). Observou-se como resultado que havia distribuição preferencial nos seguintes grupos de diagnósticos, a favor do Comparativo; i) CS II - Classificação Suplementar de Fatores que Exercem Influência sobre o Estado de Saúde e Oportunidade de Contratos com Serviços de Saúde e ii) IX - Doenças do Aparelho Digestivo; enquanto que, no Grupo de professores de EF, i.e. Observacional, tratou-se de predomínio significante a favor de: i) XIII - Doenças do Sistema Osteomuscular e do Tecido Conjuntivo e ii) XVII - Lesões e Envenenamentos. Assim, entendeu-se que, tendo os docentes maneiras de viver ou de ser resultantes de situações de algum modo relacionado às suas atividades profissionais, os de EF são acometidos, mais freqüentemente, por esse tipo de agravo.